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細胞凋亡實驗
2010-7-2
1843
二、實驗原理細胞死亡根據(jù)其性質(zhì)、起源及生物學(xué)意義區(qū)分為凋亡和壞死兩種不同類型。凋亡普遍存在于生命界,在生物個體和生存中起著非常重要的作用。它是細胞在一定生理條件下一系列順序發(fā)生事件的組合,是細胞遵循一定規(guī)律自己結(jié)束生命的自主控制過程。細胞凋亡具有可鑒別的形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)特征。在形態(tài)上可見凋亡細胞與周圍細胞脫離接觸,細胞變園,細胞膜向內(nèi)皺縮、胞漿濃縮、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張、細胞核固縮破裂呈團塊狀或新月狀分布、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和細胞膜進一步融合將細胞分成多個完整包裹的凋亡小體,凋亡小體zui后被吞噬...
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T淋巴細胞的分離技術(shù)
2010-7-1
1962
(一)原理混合單個核細胞懸液在通過尼龍毛柱時,B細胞、漿細胞、單核細胞和一些輔助細胞被選擇性粘附于尼龍毛上,而多數(shù)T細胞則通過尼龍毛柱,這是獲得富含T細胞群的有效方法。(二)材料及試劑1.尼龍毛(FemwallLaboratories,LP-1LeukoqakleukocyteFilters)。2.燒杯、鋁箔、漏斗、一次性手套等。3.裝填尼龍毛柱,一次性注射器。4.取自然沉降的上層血漿,過聚蔗糖—泛影葡胺分層液后,獲取的血漿和分層液之間的單個核細胞層。(三)操作方法1.尼龍毛...
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細胞凋亡的幾種檢測方法
2010-6-30
2010
一、形態(tài)學(xué)觀察方法1、HE染色、光鏡觀察:凋亡細胞呈圓形,胞核深染,胞質(zhì)濃縮,染色質(zhì)成團塊狀,細胞表面有“出芽”現(xiàn)象。2、丫啶橙(AO)染色,熒光顯微鏡觀察:活細胞核呈黃綠色熒光,胞質(zhì)呈紅色熒光。凋亡細胞核染色質(zhì)呈黃綠色濃聚在核膜內(nèi)側(cè),可見細胞膜呈泡狀膨出及凋亡小體。3、臺盼藍染色:如果細胞膜不完整、破裂,臺盼藍染料進入細胞,細胞變藍,即為壞死。如果細胞膜完整,細胞不為臺盼藍染色,則為正常細胞或凋亡細胞。此方法對反映細胞膜的完整性,區(qū)別壞死細胞有一定的幫助。4、透射電鏡觀察:...
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生物傳感器的研究現(xiàn)狀及應(yīng)用
2010-6-25
2770
一、引言從1962年,Clark和Lyonszui先提出生物傳感器的設(shè)想距今已有40年。生物傳感器在發(fā)酵工藝、環(huán)境監(jiān)測、食品工程、臨床醫(yī)學(xué)、軍事及軍事醫(yī)學(xué)等方面得到了深度重視和廣泛應(yīng)用。在zui初15年里,生物傳感器主要是以研制酶電極制作的生物傳感器為主,但是由于酶的價格昂貴并不夠穩(wěn)定,因此以酶作為敏感材料的傳感器,其應(yīng)用受到一定的限制。近些年來,微生物固定化技術(shù)的不斷發(fā)展,產(chǎn)生了微生物電極。微生物電極以微生物活體作為分子識別元件,與酶電極相比有其獨到之處。它可以克服價格昂貴...
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小鼠單個核細胞分離一步梯度法去除死細胞
2010-6-24
2406
基本原理活細胞(密度較小)和死細胞(密度較大)密度不同,從而有助于將活的淋巴細胞和紅細胞分離。附加材料高密度溶液:Ficoll-Paque(Ficoll和泛影酸鈉;PharmaciaLKB)或Lympholyte-M(Cedarlane)12ml或50ml聚丙烯離心管(比聚苯乙烯離心管好)注:Ficoll-Paque和Lympholyte-M的密度與溫度有關(guān);該方法中所采用的以及其他商品化的高密度溶液適合在室溫中使用。因此應(yīng)注意使細胞懸液、離心和高密度溶液控制在室溫。否則會因...
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蛋白質(zhì)的濃縮技術(shù)方法
2010-6-23
1819
(一)濃縮膠濃縮法濃縮膠是一種高分子網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的有機聚合物,具有很強的吸水性能。每克干膠可吸水120ml~150ml。它能吸收低分子量的物質(zhì),如水、葡萄糖、蔗糖、無機鹽等,適宜濃縮10000分子量以上的生物大分子物質(zhì)。濃縮后,蛋白質(zhì)的回收率可達80%~90%。比濃縮膠應(yīng)用方便,直接加入被濃縮的溶液中即可。必須注意,濃縮溶液的pH值應(yīng)大于被濃縮物質(zhì)的等電點,否則在濃縮膠表面產(chǎn)生陽離子交換,影響濃縮物質(zhì)的回收率。(二)冷凍干燥濃縮法這是濃縮蛋白質(zhì)的一種較好的辦法,它既使蛋白質(zhì)不易變...