脑钠肽-白介素4|亚洲精品日韩激情在线电影|白介素8试剂盒-研域(上海)化学试剂有限公司

首頁 > 技術文章 > 研域(上海)教您細胞是怎么轉染的

研域(上海)教您細胞是怎么轉染的

2018-10-26 [2198]

 轉染 ,是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。跟著基因與蛋白功用研討的深化,轉染現在已成為試驗室工作中常常觸及的底子方法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微打針和基因槍歸于通過物理方法將基因導入細胞的*;化學介導方法許多,如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術;生物介導方法,有較為原始的原生質體轉染,和現在比較多見的各種病毒介導的轉染技術。
 志向細胞轉染方法,應該具有轉染功率高、細胞毒性小等長處。病毒介導的轉染技術,是現在轉染功率的方法,同時具有細胞毒性很低的優勢。但是,病毒轉染方法的預備程序雜亂,常常對細胞類型有很強的選擇性,在一般試驗室中很難廣泛。其它物理和化學介導的轉染方法,則各有其特色。
需求指出的一點,不管選用哪種轉染技術,要取得*優的轉染效果,或許都需求對轉染條件進行優化。影響轉染功率的要素許多,從細胞類型、細胞培養條件和細胞生長情況,到轉染方法的操作細節,都需求考慮。
一、細胞傳代
1. 試驗預備:200ul/1mlTip頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌),酒精棉球,廢液缸,試管架,微量移液器,記號筆,培養皿,離心管。
2. 棄掉培養皿中的培養基,用1ml的PBS溶液洗刷兩次。
3. 用Tip頭參與1ml Trypsin液,消化1分鐘(37℃,5%CO2 )。用手輕拍培養瓶壁,查詢到細胞*從壁上脫落下來中止。
4. 參與1ml的含血清培養基中止反應。
5. 用Tip頭屢次吹吸,使細胞*分散開。
6. 將培養液裝入離心管中,1000rpm離心5min。
7. 用培養液重懸細胞,細胞計數后選擇0.8X106個細胞參與一個35mm培養皿。
8. 將適合體積*培養液參與離心管中,混勻細胞后悄然參與培養皿中,使其均勻分布。
9. 將培養皿轉入CO2培養箱中培養,第二天轉染。
二、細胞轉染
1. 轉染試劑的預備
① 將400ul去核酸酶水參與管中,轟動10秒鐘,溶解脂狀物。
② 轟動后將試劑放在-20攝氏度保存,運用前還需轟動。
2. 選擇適合的混合比例(1:1-1:2/脂質體體積:DNA質量)來轉染細胞。在一個轉染管中參與適合體積的無血清培養基。參與適合質量的MyoD或許EGFP的DNA,轟動后在參與適合體積的轉染試劑,再次轟動。
3. 將混合液在室溫放置10―15分鐘。
4. 吸去培養板中的培養基,用PBS或許無血清培養基清洗一次。
5. 參與混合液,將細胞放回培養箱中培養一個小時。
6. 屆時后,根據細胞品種決議是否移除混合液,之后參與*培養基繼續培養24-48小時。
三、第2次細胞傳代
1. 在轉染后24小時,查詢試驗效果并記載綠色熒光蛋白表達情況。
2. 再次進行細胞傳代,按照免疫染色適合的密度0.8X105個細胞/35mm培養皿將細胞從頭轉入培養皿中。
3. 在正常條件下培養24小時后按照染色要求條件固定。

主站蜘蛛池模板: 扒渣机,铁水扒渣机,钢水扒渣机,铁水捞渣机,钢水捞渣机-烟台盛利达工程技术有限公司 | 扬尘在线监测系统_工地噪声扬尘检测仪_扬尘监测系统_贝塔射线扬尘监测设备「风途物联网科技」 | 地埋式垃圾站厂家【佳星环保】小区压缩垃圾中转站转运站 | 拉力测试机|材料拉伸试验机|电子拉力机价格|万能试验机厂家|苏州皖仪实验仪器有限公司 | 盘装氧量分析仪-防爆壁挂氧化锆分析仪-安徽吉帆仪表有限公司 | 高铝砖-高铝耐火球-高铝耐火砖生产厂家-价格【荣盛耐材】 | 意大利Frascold/富士豪压缩机_富士豪半封闭压缩机_富士豪活塞压缩机_富士豪螺杆压缩机 | 低噪声电流前置放大器-SR570电流前置放大器-深圳市嘉士达精密仪器有限公司 | 气弹簧定制-气动杆-可控气弹簧-不锈钢阻尼器-工业气弹簧-可调节气弹簧厂家-常州巨腾气弹簧供应商 | 珠海白蚁防治_珠海灭鼠_珠海杀虫灭鼠_珠海灭蟑螂_珠海酒店消杀_珠海工厂杀虫灭鼠_立净虫控防治服务有限公司 | 硬齿面减速机[型号全],ZQ减速机-淄博久增机械 | 真丝围巾|真丝丝巾|羊绒围巾|围巾品牌|浙江越缇围巾厂家定制 | 劳动法网-专业的劳动法和劳动争议仲裁服务网 | 青岛侦探_青岛侦探事务所_青岛劝退小三_青岛调查出轨取证公司_青岛婚外情取证-青岛探真调查事务所 | 英思科GTD-3000EX(美国英思科气体检测仪MX4MX6)百科-北京嘉华众信科技有限公司 | 苏州教学设备-化工教学设备-环境工程教学模型|同科教仪 | 定制/定做冲锋衣厂家/公司-订做/订制冲锋衣价格/费用-北京圣达信 | 盐城网络公司_盐城网站优化_盐城网站建设_盐城市启晨网络科技有限公司 | 万师讲师网-优质讲师培训师供应商,讲师认证,找讲师来万师 | SMN-1/SMN-A ABB抽屉开关柜触头夹紧力检测仪-SMN-B/SMN-C-上海徐吉 | 卸料器-卸灰阀-卸料阀-瑞安市天蓝环保设备有限公司 | 黑龙江「京科脑康」医院-哈尔滨失眠医院_哈尔滨治疗抑郁症医院_哈尔滨精神心理医院 | 耐酸碱胶管_耐腐蚀软管总成_化学品输送软管_漯河利通液压科技耐油耐磨喷砂软管|耐腐蚀化学软管 | 茶楼装修设计_茶馆室内设计效果图_云臻轩茶楼装饰公司 | 超声波清洗机-超声波清洗设备定制生产厂家 - 深圳市冠博科技实业有限公司 | 三佳互联一站式网站建设服务|网站开发|网站设计|网站搭建服务商 赛默飞Thermo veritiproPCR仪|ProFlex3 x 32PCR系统|Countess3细胞计数仪|371|3111二氧化碳培养箱|Mirco17R|Mirco21R离心机|仟诺生物 | 特种电缆厂家-硅橡胶耐高温电缆-耐低温补偿导线-安徽万邦特种电缆有限公司 | 有机废气处理-rto焚烧炉-催化燃烧设备-VOC冷凝回收装置-三梯环境 | 小青瓦丨古建筑瓦丨青瓦厂家-宜兴市徽派古典建筑材料有限公司 | 电动百叶窗,开窗器,电动遮阳百叶,电动开窗机生产厂家-徐州鑫友工控科技发展有限公司 | 北京宣传片拍摄_产品宣传片拍摄_宣传片制作公司-现像传媒 | 武汉森源蓝天环境科技工程有限公司-为环境污染治理提供协同解决方案 | 葡萄酒灌装机-食用油灌装机-液体肥灌装设备厂家_青州惠联灌装机械 | 板框压滤机-隔膜压滤机配件生产厂家-陕西华星佳洋装备制造有限公司 | 精密模具-双色注塑模具加工-深圳铭洋宇通 | 地埋式垃圾站厂家【佳星环保】小区压缩垃圾中转站转运站 | 自动售货机_无人售货机_专业的自动售货机运营商_免费投放售货机-广州富宏主官网 | 水厂自动化-水厂控制系统-泵站自动化|控制系统-闸门自动化控制-济南华通中控科技有限公司 | 细砂提取机,隔膜板框泥浆污泥压滤机,螺旋洗砂机设备,轮式洗砂机械,机制砂,圆锥颚式反击式破碎机,振动筛,滚筒筛,喂料机- 上海重睿环保设备有限公司 | 威实软件_软件定制开发_OA_OA办公系统_OA系统_办公自动化软件 | 沙盘模型公司_沙盘模型制作公司_建筑模型公司_工业机械模型制作厂家 |