人環(huán)磷酸腺苷ELISA檢測試劑盒　　　　　　　　　　

本試劑僅供研究使用      標(biāo)本：細胞上清液

試驗原理：
　　　　cAMP試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知cAMP濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進行檢測。先將cAMP和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中cAMP的濃度呈比例關(guān)系。

自備材料
蒸餾水。
加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

人環(huán)磷酸腺苷ELISA檢測試劑盒　

操作注意事項
試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

人環(huán)磷酸腺苷ELISA檢測試劑盒　

操作步驟
使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。

6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

人環(huán)磷酸腺苷ELISA檢測試劑盒　

結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的cAMP標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的cAMP含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

3、檢測值范圍：0-800nmol/L

4、敏感度： 1.0 nmol/L

phospho-ATR/ACTR（Ser428）  磷酸化ATR抗體 0.1ml
Phospho-ATP1A1（Ser23）  磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體 0.1ml
phospho-ATP citrate lyase（Ser455）  磷酸化三磷酸腺檸檬酸裂解酶抗體 0.1ml
phospho-BAD（Ser128）  磷酸化相關(guān)死亡促進因子抗體 0.1ml
glypican 3/GPC3（Intestinal protein OCI-5; GTR2-2; MXR7） 磷脂酰基醇蛋白聚糖-3抗體 0.2ml
Glypican 4（Glypican proteoglycan 4） 磷脂酰基醇蛋白聚糖-4抗體 0.2ml
Grb2/Ash（Growth factor receptor-bound protein 2） 生長因子受體結(jié)合蛋白2抗體 0.2ml
GZMA（granzyme A） 顆粒酶A抗體 0.2ml
GZMB/CCPI（Granzyme B） 顆粒酶B抗體 0.2ml
Gzmd/CCP5（Granzyme D） 顆粒酶D抗體 0.2ml
Gzmg/MCSP-1（Granzyme G） 顆粒酶G抗體 0.2ml
rGST（Recombinant Glutathione S-T Ahents） 重組谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶GST標(biāo)簽蛋白抗體 0.2ml
A/H1N1-M2 Human（Avian influenza Matrix Protein-2 Human） A型人流感病毒H1N1-M2蛋白抗體 0.2ml
UTS2R/GPR14（Urotensin II receptor：G Protein Coupled Receptor 14） G蛋白偶聯(lián)受體14抗體 0.2ml
GzmH/CTSGL2（Granzyme H） 顆粒酶H抗體 0.2ml
GRGDS（Gly-Arg-Gly-Asp-Ser） 抗粘附多肽抗體 0.2ml
GPR30（G Protein Coupled Receptor 30） G蛋白偶聯(lián)受體30抗體 0.1ml
GPR30（G Protein Coupled Receptor 30） G蛋白偶聯(lián)受體30抗體 0.2ml
gremlin 骨形態(tài)形成蛋白拮抗蛋白抗體 0.2ml
GnRHR（Gonadotropin-releasing hormone receptor） 促性腺激素釋放激素受體抗體 0.2ml
GRP75（G protein-coupled receptor 75） G蛋白偶聯(lián)受體75抗體 0.2ml
GRP（ Gastrin Releasing Peptide ） 促胃泌素釋放肽抗體 0.1ml
GRP（ Gastrin Releasing Peptide ） 促胃泌素釋放肽抗體 0.2ml
phospho-GSK-3β（pSer9） 磷酸化葡萄糖合成激酶-3β抗體 0.2ml
GPA/GYPA/CD23（Glycophorin A） 血型糖蛋白A（涎糖蛋白）抗體 0.2ml
GPR78（G protein-coupled receptor 78） G蛋白偶聯(lián)受體78抗體 0.2ml