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九月學(xué)習(xí):ELISA試劑盒技術(shù)資料

2014-10-07 [2408]

新學(xué)期已經(jīng)進(jìn)行兩周了,九月也近乎中旬,那么面對(duì)新學(xué)期的開(kāi)始,是不是讓不少ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的新手同學(xué)們有點(diǎn)兒手足無(wú)措呢?下面一起來(lái)看下今天為您分享的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容吧,九月學(xué)習(xí):ELISA試劑盒技術(shù)資料。
·DIY夾心法ELISA常見(jiàn)技術(shù)指南 
    選擇抗體時(shí)選擇一個(gè)單抗和一個(gè)多抗進(jìn)行配對(duì);若選擇兩個(gè)單抗,必須識(shí)別不同表位的抗體;從同一家公司選擇抗體對(duì)。ELISA實(shí)驗(yàn)中為了確定*信號(hào)和zui低背景應(yīng)將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測(cè)抗體(0.25-2μg/ml)在預(yù)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時(shí),應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋。按試劑說(shuō)明書(shū)常規(guī)提供的范圍進(jìn)行操作。標(biāo)準(zhǔn)品的配制:對(duì)于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū),注意每批的細(xì)節(jié)。在使用細(xì)胞因子前,瞬時(shí)離心試劑瓶,盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子。根據(jù)每批說(shuō)明書(shū)中的細(xì)節(jié),將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。
    一般待測(cè)抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過(guò)將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml。可利用標(biāo)準(zhǔn)的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類(lèi)試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。為了優(yōu)化靈敏度,建議放置一個(gè)晚上孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。若使用過(guò)氧化物酶作為顯色系統(tǒng),應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉,疊氮鈉可抑制過(guò)氧化物酶的活性。當(dāng)測(cè)定混合液體中的抗原時(shí)。·ELISA用處
  1. 將酶催化反應(yīng)的放大作用和抗原抗體親和反應(yīng)的高度專(zhuān)一性、特異性相結(jié)合,以酶標(biāo)記的抗原或抗體作為主要試劑進(jìn)行免疫測(cè)試,所以具有很高的靈敏度。
  2. 實(shí)現(xiàn)了在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平上示蹤抗原或抗體的所在部位,或在微克、甚至納克水平上對(duì)其進(jìn)行定量。
  3. 其抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性。
  4. 為濃縮液,配有稀釋液,稀釋后直接可用,無(wú)需另行配置。
·灰區(qū)的設(shè)置
    通常情況下,ELISA定性實(shí)驗(yàn)以“陽(yáng)性”和“陰性”來(lái)報(bào)告結(jié)果,兩者間有一條分界線被稱為“陽(yáng)性判斷值”(cut-off value,CO值),這是定性免疫測(cè)定結(jié)果報(bào)告的依據(jù)。
·標(biāo)本復(fù)查
    ELISA手工檢測(cè)過(guò)程復(fù)雜,影響因素較多,即使室內(nèi)質(zhì)控在控,也可能因孔間差異而造成結(jié)果的差異,因此加大復(fù)查力度是保證結(jié)果準(zhǔn)確性的可靠方法,比如對(duì)HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等項(xiàng)目的可疑、弱陽(yáng)性標(biāo)本及少見(jiàn)模式的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行復(fù)查。
    了解更多相關(guān)ELISA試劑盒技術(shù)資料,歡迎您關(guān)注上海酶聯(lián)生物公司,購(gòu)我司試劑盒有任何相關(guān)問(wèn)題咨詢,我公司技術(shù)人員會(huì)在半個(gè)工作日內(nèi)給出解決方案。

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