目前常用的幾種ELISA試劑盒方法有：測定抗體的間接法，測定抗原的雙抗體夾心法和測定抗原的競爭法等。本實驗采用間接法測定單克隆抗體效價。其主要過程為：首先將已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反應板的凹孔內(nèi)，保溫后洗滌以除去未結合的雜蛋白質(zhì)，加酶標抗抗體，保溫后洗滌，加底物保溫30分鐘后，加酸或堿終止酶促反應，用目測或光電 
   比色測定抗體含量。小鼠ELISA試劑盒是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。免疫酶技術是將酶標記在抗體/抗原分子上，形成酶標抗體/酶標抗原，稱為酶結合物。該酶結合物的酶在免疫反 應后，作用于底物使之呈色，根據(jù)顏色的有無和深淺，定位或定量抗原/抗體。ELISA試劑盒法是免疫酶技術的一種，其特點是利用聚苯乙烯微量反應板(或球)吸附抗原/抗體，使之固相化，免疫反應和酶促反應都在其中進行。在每次反應后都要反復洗 滌，這既保證了反應的定量關系，也避免了末反應的游離抗體/抗原的分離步驟。在法中。酶促反應只進行一次，而 抗原、抗體的免疫反應可進行一次或數(shù)次，即可用二抗(抗抗體)、三抗再次進行免疫反應。乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，而在洗滌時應把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來。可以說在ELISA操作中，洗滌是zui主要的關鍵技術，應引起操作者的高度重視，操作者應嚴格按要求洗滌，不得馬虎。

    洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液，各種 試劑 盒的洗液不要混用。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結合是疏水性的，非離子型洗滌劑既含疏水基團，也含親水基團，其疏水基團與蛋白質(zhì)的疏水基團借疏水鍵結合，從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結合，ELISA試劑盒并借助于親水基團和水分子的結合作用，使蛋白質(zhì)回復到水溶液狀態(tài)，從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20，其濃度可在0.05%-0.2%之間，高于0.2%時，可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗的靈敏度。